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一枝蒿中一枝蒿酮酸的含量高效液相色譜法測(cè)定

發(fā)布時(shí)間：2019/11/22 9:52:56     瀏覽次數(shù)：1695

【關(guān)鍵詞】  一枝蒿 一枝蒿酮酸 高效液相色譜法

目的建立新疆一枝蒿中一枝蒿酮酸含量測(cè)定的方法。方法采用高效液相色譜法（HPLC），SupelcosilTMLC18色譜柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（50∶50）；流速0.8 ml?min-1，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)243 nm。結(jié)果一枝蒿酮酸和其他組分可達(dá)基線分離，線性范圍0.042 4～0.212 0 μg（r = 0.999 6），平均回收率為96.4 %，方法精密度RSD=2.5%（n=3)。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確靈敏，分離效果好，可為新疆一枝蒿質(zhì)量控制提供方法依據(jù)。

　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determining rupestonic acid in Artemisia rupestris L. growing in Xinjiang. MethodsA SupelcosilTMLC18 column (4.6 mm×250 mm,5 μm) and mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid solution (50:50) were used at the column temperature of 30℃. The flow rate was 0.8 ml?min-1 and detection wavelength was 243 nm.ResultsThe quantity of rupestonic acid in the range of 0.042 4～0.212 0 μg versus peak area was linear (r = 0.999 6). The average recovery was 96.4 %, and method precision was 2.8% (RSD=2.8%, n= 6). ConclusionThe method is  simple, quick, accurate, high sensitive and suitable for quality control of Artemisia rupestris L. growing in Xinjiang.

　　Key words：Artemisia rupestris L.;  Rupestonic acid;  HPLC

　　新疆一枝蒿Artemisia rupestris L.系菊科蒿屬植物巖蒿的全草，為多年生草本，生長(zhǎng)在海拔1 100～2 900 m的地區(qū)，分布于中國(guó)新疆、中亞和歐洲等地［1］。一枝蒿是新疆哈薩克族和維吾爾族民間傳統(tǒng)用藥，國(guó)內(nèi)臨床資料表明，它具有解毒、健胃消食、抗過(guò)敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效［2～4］；自古以來(lái)新疆流傳著“家有一枝蒿，百病都除掉”的民間諺語(yǔ)，一枝蒿用于治療毒蛇咬傷、蕁麻疹、消化不良、跌打紅腫、感冒發(fā)燒、咽喉腫痛等癥。以一枝蒿為主藥的復(fù)方制劑，已針對(duì)感冒和過(guò)敏性鼻炎等癥上市銷售。一枝蒿中含有黃酮類、酮酸類、氨基酸類、苷類、多糖類、揮發(fā)油類、多肽和生物堿類等化學(xué)成分［5］，其中倍半萜成分――一枝蒿酮酸含量較高［6］，以該化合物作為藥材對(duì)照品能夠較好的控制藥材質(zhì)量，且倍半萜類成分大多具有抗腫瘤等多種生物活性。文章建立一枝蒿酮酸的含量測(cè)定方法，簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確可靠，可為一枝蒿藥材及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

　　1  儀器與試藥

　　Agilent 1100高效液相色譜儀，惠普化學(xué)工作站；BS110S電子天平（德國(guó) Sartorius）；SB3200超聲振蕩儀（上海Branson）。一枝蒿酮酸對(duì)照品（自制，純度99%以上）；甲醇（色譜純）；95%乙醇（分析純）；磷酸（分析純）；重蒸水；一枝蒿藥材購(gòu)于新疆維吾爾醫(yī)研究所，品種由新疆藥品檢驗(yàn)所蘇來(lái)曼主任藥師鑒定。

　　2  色譜條件

　　色譜柱為SupelcosilTMLC18色譜柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（50:50）；流速0.8 ml?min-1；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)243 nm。

　　3  方法與結(jié)果

　　3.1  溶液制備

　　3.1.1  對(duì)照品溶液制備精密稱取一枝蒿酮酸對(duì)照品5.3 mg,置5 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，4℃保存，臨用前吸取0.2 ml置10 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成21.2 μg?ml-1的對(duì)照品溶液。

　　3.1.2  供試品溶液制備取干燥一枝蒿全草適量，研成粗粉，精密稱取50 mg,置10 ml 量瓶中，加95% 乙醇適量，超聲提取20 min，放置室溫，添加少量95%乙醇至刻度，搖勻，靜置后精密吸取2 ml置10 ml量瓶中，添加95%乙醇至刻度，進(jìn)樣前經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾。

　　3.2  系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)取含量為21.2 μg?ml-1對(duì)照品溶液進(jìn)樣,以一枝蒿酮酸計(jì)理論板數(shù)不低于6 000 ,峰形對(duì)稱，色譜分離良好，雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

　　3.3  進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn)取一枝蒿酮酸對(duì)照品溶液  4 μl分別進(jìn)樣5次，峰面積的RSD=1.1 %。取樣品溶液10 μl分別進(jìn)樣5次，一枝蒿酮酸峰面積的RSD=1.8 %。

　　3.4  線性關(guān)系考察精密吸取一枝蒿酮酸對(duì)照品溶液2，4，6，8和10 μl，分別進(jìn)樣測(cè)定，以一枝蒿酮酸峰面積對(duì)進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線性回歸，得方程為：Y= 3.920×103X-28.39 (r=0.999 6 )。一枝蒿酮酸在0.042 4～0.212 0 μg 范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

　　3.5  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批次樣品，按“3.1.2”項(xiàng)下方法制備6 份樣品溶液，按“色譜條件”項(xiàng)下方法測(cè)定，一枝蒿酮酸峰面積的RSD=2.2 %(n=6)。

　　3.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液1 份，室溫放置，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣，測(cè)得峰面積并計(jì)算RSD=2.5 %（n= 5），說(shuō)明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

　　3.7  加樣回收率實(shí)驗(yàn)取一枝蒿全草粉末50 mg 共3份，按“3.1.2”項(xiàng)下方法處理后，分別加入對(duì)照品溶液（106 μg?ml-1）0.50，0.75和1.00 ml， 按“色譜條件”項(xiàng)下方法操作和測(cè)定，一枝蒿酮酸回收率為96.4 %，RSD=2.5 %（n= 3）。

　　3.8  樣品測(cè)定分別取一枝蒿花、莖、葉和全草粉末各5份，按供試品溶液制備方法處理，吸取供試品溶液10 μl進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算一枝蒿酮酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1  一枝蒿不同部位一枝蒿酮酸含量（略）

　　4  討論

　　測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一枝蒿酮酸在一枝蒿的不同部位分布不同，在花和葉中含量較高，超過(guò)了1%，而莖中含量較低，只有0.04%。一枝蒿是全草入藥，其中莖的下部為木質(zhì)，重量較大，因此，使一枝蒿酮酸在全草中的含量有所降低。

　　一枝蒿酮酸是倍半萜類化合物，雖然結(jié)構(gòu)中含有極性較大的羧基，但其水溶性卻很差，易溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，樣品處理過(guò)程中水對(duì)其提取效率很低，而乙醇對(duì)其則有較好的提取效果。

　　一枝蒿酮酸含量測(cè)定的色譜條件為甲醇-磷酸水溶液，峰形對(duì)稱，分離度好，其他雜質(zhì)對(duì)測(cè)定沒(méi)有干擾，但溫度對(duì)測(cè)定有著十分大的影響，當(dāng)柱溫上升5 ℃，則保留時(shí)間會(huì)隨著測(cè)定的進(jìn)行逐步提前，直至無(wú)法測(cè)定，將溫度控制在30 ℃時(shí)，保留時(shí)間才能較好的穩(wěn)定下來(lái)。