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嬰幼兒奶粉中5種核苷酸分析報告
發(fā)布時間：2019/10/11 14:19:46 瀏覽次數(shù)：1214
核苷酸是生命遺傳物質(zhì)RNA的基本組成單位，是體內(nèi)合成核酸的前身物。嬰幼兒正處在快速生長發(fā)育階段，身體對核苷酸的需求量超過體內(nèi)合成核苷酸的能力，但母乳可為嬰幼兒提供所需核苷酸。而對于沒有母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不僅可提高免疫力，也可保護嬰幼兒腸胃健康。
樣品名稱
中文同義名
英文簡稱
結構式
分子式
分子量
CAS號
胞嘧啶核苷酸
胞苷酸
CMP
C9H14N3O8P
323.2
63-37-6
次黃嘌呤核苷酸
N/A
IMP
C10H13N4O8P
348.21
131-99-7
腺嘌呤核苷酸
腺苷酸
AMP
C10H14N5O7P
347.22
61-19-8
尿嘧啶核苷酸
尿苷酸
UMP
C9H13N2O9P
324.18
58-97-9
鳥嘌呤核苷酸
鳥苷酸
GMP
C10H14N5O8P
363.22
85-32-5
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設備
高效液相色譜儀，紫外檢測器；
試劑材料
屈臣氏水；甲醇為色譜純；磷酸二氫鉀色譜純；磷酸、四丁基硫酸氫銨為分析純；
胞嘧啶核苷酸（胞苷酸）、腺嘌呤核苷酸（腺苷酸）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸）、次黃嘌呤核苷酸、鳥嘌呤核苷酸（鳥苷酸）標準品；
高效液相色譜柱：Venusil ? C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm
樣品制備
5種核苷酸混合標準溶液：分別稱取核苷酸標準品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP、IMP各5mg(精確至0.1mg)，用水溶解成并定容至100mL，混勻，即得；
某品牌嬰幼兒奶粉樣品溶液：稱取5.0g奶粉樣品，用20mL熱水(50~60℃)充分溶解試樣，冷卻至室溫；用10%乙酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.1，移至50mL容量瓶中，定容，濾紙過濾，所得濾液用0.45μm濾膜過濾，即得樣品溶液。
色譜條件
色譜柱：
Venusil ? C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm；
流動相：
稱取1.360g磷酸二氫鉀，加0.4753g四丁基硫酸氫銨至1000mL容量瓶中，用水補齊至刻度，準確加2.5ml磷酸和40mL甲醇，混勻后超聲10min。（備注：由于流動相中含離子對試劑，色譜柱需要先用流動相平衡至少90min后，再運行4針標準品，系統(tǒng)才能穩(wěn)定）
波長：254nm；
柱溫：30℃；
流速：1.0mL/min；
進樣量：10μL。
結果與討論
本實驗按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil? C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標準溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進行檢測，由以下結果可知，嬰幼兒奶粉樣品中五種核苷酸與雜質(zhì)的分離度大于1.5，回收率97%~109%，滿足實驗需求。
表2.5種核苷酸實驗數(shù)據(jù)
樣品名稱
化合物名稱
保留時間/min
理論塔板數(shù)
分離度
拖尾因子
備注
5種核苷酸混標
CMP
3.660
15803
—
0.98
圖1
AMP
5.608
16882
13.46
0.97
GMP
11.061
18806
21.99
0.96
UMP
21.226
21178
22.40
0.98
IMP
26.011
20584
7.30
0.99
圖1.Venusil ? C18 Plus色譜柱5種核苷酸混標高效液相色譜圖
表3.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸實驗數(shù)據(jù)
化合物名稱
保留時間/min
分離度
拖尾因子
備注
CMP
3.659
—
0.99
圖2
雜質(zhì)1
4.342
5.73
-
AMP
5.605
8.48
0.94
雜質(zhì)2
6.081
2.74
-
GMP
11.051
18.91
0.97
雜質(zhì)3
19.841
20.47
-
UMP
21.223
2.57
0.95
IMP
26.015
7.30
0.99
圖2.Venusil? C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品溶液高效液相色譜圖
表4.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸加標實驗結果
化合物名稱
保留時間/min
加標濃度（ug/mL）
回收率（%）
備注
CMP
3.660
12.2
108.4
圖3
AMP
5.605
7.6
101.8
GMP
11.050
9.2
97.7
UMP
21.213
14.8
106.3
IMP
26.028
11
101.9
圖3.Venusil ?C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品加標溶液高效液相色譜圖
結論
本實驗按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil? C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標準溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進行檢測，結果表明在上述實驗條件下，Venusil?C18 Plus色譜柱可用于嬰幼兒奶粉中5種核苷酸的分析檢測。
相關標準品
樣品名稱 化合物名稱 保留時間/min 理論塔板數(shù) 分離度 拖尾因子 備注 5種核苷酸混標 CMP 3.66 15803 — 0.98 圖1 AMP 5.608 16882 13.46 0.97 GMP 11.061 18806 21.99 0.96 UMP 21.226 21178 22.4 0.98 IMP 26.011 20584 7.3 0.99
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